全新高精准度彗星检测DNA损伤试剂盒(适合3孔载玻片)

彗星检测试剂盒（3孔载玻片）是一种单细胞凝胶电泳检测（SCGE），用于检测细胞中DNA损伤的快速灵敏测试。其原理是，在器官或组织遭受（如辐射、重金属等）后，细胞中的单链或双链DNA断裂，将细胞与融化的琼脂混合并放在玻片上，然后用裂解溶液破坏细胞膜，用碱性溶液解开DNA。最后，对样品进行电泳，在电场的作用下，正常细胞的大分子DNA迁移较短的距离，完整的DNA保留在细胞核的范围内，DNA碎片从细胞核中迁移出来，用PI染料染色，在荧光显微镜下观察，完整的脱氧核糖核酸形成圆形或微辫状；DNA碎片形成彗星状图案。根据电泳缓冲液的pH值，可分为中性彗星试验（pH=8.4）和碱性彗星试验（pH>13）。中性彗星法主要用于检测DNA双链断裂损伤，碱性彗星法具有较高的灵敏度，可用于检测较少的单链和双链断裂损害。

艾美捷彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片）：

Cat #: D-AKE3040

Size: 15T

Storage: Stored at 4°C for 6 months, protected from light

彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片）供应材料和储存条件：

彗星法DNA损伤分析试剂盒（3孔载玻片）化验程序：

A.样品的制备

1.在执行前，准备1xLysis缓冲液、碱性溶液和电泳溶液（见试剂制备）化验。使用前将所有溶液冷却至4℃。

2.将琼脂（低熔点）在水浴中加热至90-95°C 20分钟，直到琼脂液化，然后转移将瓶子放入设定为37°C的水浴中20分钟，冷却并储存。

3.彗星玻片在37°C下预热。在Comet Slide上每孔添加100μL琼脂，形成基底层确保完全覆盖油井。保持彗星滑道水平，将彗星滑道转移到4°C温度下15分钟。

4.制备细胞样品，如下所示：

悬浮细胞：以1000g离心细胞5分钟，并丢弃上清液。用冰冷的PBS洗涤细胞一次，离心并丢弃上清液。最后，将细胞以1-5×105个细胞/mL重悬于冰冷的PBS中。

粘附细胞：通过刮取细胞，轻轻地将细胞从培养皿中去除。将细胞悬浮液转移到离心管中以1000g离心5分钟，丢弃上清液。用冰冷的PBS清洗细胞一次，离心并丢弃上清液。最后，将细胞以1-5×105个细胞/mL重悬于冰冷的PBS中。

组织制备：用解剖剪刀将一小块组织切成块，加入1-2毫升冰冷的PBS含有20mM EDTA，将组织/细胞悬浮液保持5分钟而不移动，并将上清液转移到离心管，避免转移碎屑。以1000g离心5分钟，并丢弃上清液。最后将细胞以1-5×105个细胞/mL重悬于冰冷的PBS中。

5.将细胞样品与琼脂以1:10的比例（N/N）混合，通过移液管充分混合，并立即转移75μl/孔以在不干扰基层的情况下完全覆盖。

6.保持彗星滑道水平，将彗星滑道转移到4°C的暗室中15分钟。

7.将彗星玻片水平转移到容器中预冷的1×裂解缓冲液（约25mL/彗星玻片）中在黑暗中在4°C下持续30-60分钟。

8.小心地从容器中吸出1xLysis缓冲液，并用预冷的碱性溶液替换（约25毫升/彗星玻片）。将彗星玻片在溶液中浸泡30分钟，温度为4℃，黑暗中。